酵母细胞表达人白细胞介素10的方法　 　




申请专利号 CN02128001.0 　
专利申请日 2002.12.07 　
名称 酵母细胞表达人白细胞介素10的方法　 　
公开（公告）号 CN1506463
公开（公告）日 2004.06.23 　
类别 化学；冶金
颁证日 　
优先权  
申请（专利权） 中国人民解放军第三军医大学 　
地址 400038重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号　
发明（设计）人 邹全明;井申荣 　
国际申请  
国际公布  
进入国家日期 　
专利代理机构 重庆华科专利事务所 　
代理人 康海燕 　
摘要
本发明是酵母细胞表达人白细胞介素10的方法，技术方案是：人工合成hIL-10全基因序列，包括hIL-10的带有其信号序列和不带信号序列，分别记为shIL-10和nshIL-10，给其两端加上EcorR I和Not I酶切序列或两端都加上EcorR I酶切序列，用EcoR I和Not I分别双酶切目的基因shIL-10、nshIL-10以及毕赤酵母的整合型表达载体pPIC3.5K、pPIC9K，构建重组质粒pPIC3.5K/shIL、pPIC9K/nshIL，然后通过电穿孔、原生质体法转化毕赤酵母细胞，重组质粒和目的基因整合到酵母染色体上，应用甲醇诱导毕赤酵母进行胞内可溶性表达或胞外分泌型表达。本发明与现有在大肠杆菌中表达相比，提高人白细胞介素10的空间结构的正确折叠及其生物学活性，具有明显的优势：①酵母细胞表达hIL-10，不形成变性蛋白的包涵体，蛋白为可溶形式表达，直接形成活性蛋白；②可溶性活性蛋白有利于纯化，纯化得率高，避免包涵体复性时的损失。 　
主权项
1.一种制造重组人白细胞介素10的方法，其特征是：应用酵母表达人白细胞介素10。